01.簡介

特異性識別雙鏈DNA中酶切位點，將構建好的質粒酶切并處理成線性化雙鏈DNA模板，用于下一步mRNA合成。

01.簡介

以DNA為模板，在體外以RNA聚合酶催化合成mRNA。 體外轉錄mRNA的關鍵酶T7 RNA聚合酶，是高度特異識別T7啟動子序列的DNA依賴的5'→3' RNA聚合酶，以含有T7啟動子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板、以核苷酸（NTP）為底物，合成并啟動下游的單鏈DNA互補的RNA合成。

01.簡介

在RNA合成過程中加入無機焦磷酸酶，用于增加RNA產量。 無機焦磷酸酶通過催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽，可去除無機焦磷酸鹽對反應體系的抑制，同時為反應提供熱力學動力，從而促進產物的生成。作為一種良好的輔劑，常用于RNA、DNA、蛋白質的生物合成中。同樣用于mRNA疫苗體外大規模合成中，可提高mRNA產量。

01.簡介

在 RNA合成結束后，去除模板DNA。 DNA酶I是一種可消化單鏈或雙鏈DNA產生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的脫氧核糖核酸內切酶。它識別并切割磷酸二酯鍵，產生5'端為磷酸基團，3'端為羥基單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。

01.簡介

在 mRNA合成與修飾中加入RNA酶抑制劑，防止RNA降解。 RNA酶抑制劑可與RNA酶抑A形成1：1復合體，能極強抑制RNA酶，保護mRNA轉錄后不被降解

01.簡介

在mRNA的5'端加上Cap 0帽結構，再將Cap 0轉化為Cap 1結構。 在真核生物中，轉錄后的mRNA需要經過加帽加尾修飾，才能形成完整的結構，即在5'端形成一個帽子結構（Cap 1），3’端形成Poly A尾結構。這一系列的修飾有助于mRNA的穩定、轉運和翻譯。

牛痘病毒加帽酶通過給轉錄合成的mRNA催化加上帽子結構（Cap 0），極大提高了mRNA的穩定性和翻譯能力，使mRNA可在細胞內表達蛋白，從而避免核酸外切酶等的降解破壞。 Cap 0進一步形成cap 1結構需要2’-O甲基轉移酶（SAN2022-04）參與，該修飾可以降低RNA在體內引起的細胞先天免疫反應。

01.簡介

在mRNA的5'端加上Cap 0帽結構，再將Cap 0轉化為Cap 1結構。 Cap 1結構存在于所有真核生物mRNA，有助于穩定mRNA結構和提高翻譯效率。研究表明，體外轉錄修飾得到的Cap 1結構mRNA更不容易被免疫系統的RNA感受器（RIG-I）識別，因此在體內引起的細胞先天免疫反應更低。

01.簡介

在mRNA的3'端加上Poly A尾。

Poly A 尾結構與mRNA的穩定、轉運和翻譯密切相關。在體外轉錄mRNA過程中， Poly A加尾酶不依賴模板的存在，可以高效催化 ATP 以 AMP 的形式依次摻入到 RNA 的 3′末端，即在 RNA 的 3′末端加多聚 A 尾，最大程度還原體內加尾過程。